23 KJEMI 6 2025 problem ved analyser av små prøvemengder som enkeltgastruloider. For å kunne kvantifisere disse oksysterolene måtte først prøveprepareringen optimalisere, for å så kunne anvende den optimaliserte metoden sammen med LC–MS for kvantifisering av oksysteroler i enkeltgastruloider. Vår etablerte derivatiseringsprosedyre [3] ble optimalisert ved bruk av Experimental Design. Dette resulterte i en miniatyrisert prosedyre der reaksjonsvolumet ble redusert fra 735 µL til 75 µL, uten at det gikk på bekostning av følsomhet eller nøyaktighet. Metoden ble validert etter Eurachems retningslinjer [4]. Ved hjelp av den optimaliserte metoden kunne 24S-hydroksykolesterol, 26-hydroksykolesterol og en uidentifisert dihydroksykolesterol kvantifiseres i enkeltgastruloider. 24S-hydroksykolesterol, kjent for sin rolle i transport av kolesterol over blod– hjerne-barrieren, ble kvantifisert i høyest konsentrasjoner av alle oksysterolene som var tilstede. Vi jobber fremdeles videre med å kunne identifisere den siste dihydroksykolesterolen. Denne studien viser at nedskalering av prøveprepareringen for LC–MS-basert oksysterolanalyse kan brukes til påvisning av steroler i enkeltgastruloider. Den etablerte metoden er sensitiv, reproduserbar og mer bærekraftig. Kombinasjon av sterolanalyse med multi-omikkteknikker kan i fremtiden gi ny innsikt i regulering av signalveier under tidlig embryonal utvikling. Jeg ønsker til slutt å takke mine medforfattere av den originale artikkelen: Kristina Sæterdal Kømurcu, Igor Meszka, Aleksandra Aizenshtadt, Lydia Emilie Aakervik, Helena Hrušková, James L. Thorne, Steven Ray Wilson, Stefan Johannes Karl Krauss, og Hanne Røberg-Larsen. Artikkelen med tittel “A validated mass spectrometry platform for oxysterol analysis of single human gastruloids and liver organoids”, er innsendt til fagfellevurdering i et anerkjent internasjonalt tidsskrift. ● Referanser: [1] S. C. Van Den Brink et al., “Symmetry breaking, germ layer specification and axial organisation in aggregates of mouse embryonic stem cells,” Development, vol. 141, no. 22, pp. 4231–4242, Nov. 2014, doi: 10.1242/dev.113001. [2] W. J. Griffiths and Y. Wang, “Oxysterol research: a brief review,” Biochemical Society Transactions, vol. 47, no. 2, pp. 517–526, Apr. 2019, doi: 10.1042/BST20180135. [3] K. S. Kømurcu et al., “Mass spectrometry reveals that oxysterols are secreted from non-alcoholic fatty liver disease induced organoids,” The Journal of steroid biochemistry and molecular biology, vol. 232, pp. 106355–106355, 2023, doi: 10.1016/j.jsbmb.2023.106355. [4] “Quality in Analytical Chemistry.” Accessed: Aug. 27, 2025. [Online]. Available: https://www.eurachem.org/index.php/publications/guides/qa Figur 2. Prøver (gastruloider) og utvalgte analytter (oksysteroler) og som var i fokus av forskningen. Figur 3. Grafisk oppsummering av studien.
RkJQdWJsaXNoZXIy MTQ3Mzgy