17 KJEMI 6 2025 Tabell 3 Forbruk og prosedyre for EME metode og referansemetode for ekstraksjon av antidepressive legemidler i serum21 EME Proteinfelling og fosfolipidfjerning Prøve 120 µL serum 120 µL serum Organisk løsemiddel 9 µL 2-nitrofenyl oktyl eter 0.5 µL maursyre 375 µL acetonitril 30 µL metanol 4 µL maursyre Gass - N2 til fordamping av løsemiddel Forbruksmateriale To beholdere i ledende plast Polypropylenmembran Proteinfellingsplate Fosforlipidfjerningsplate Oppsamlingsplate Prosedyre 1. Pipettering av prøve, akseptor og membran 2. Ekstraksjon(15 min) 3. LC-MS/MS 1. Pipettering av prøve og acetonitril 2. Blanding 3. Filtrering 4. Fordampning av løsemiddel (40 min) 5. Gjenoppløsning 6. LC-MS/MS tidsforbruket så lavt som mulig. Valideringsdataene (linearitet, presisjon, nøyaktighet) var alle av høy kvalitet og i samsvar med kravene fra EMA og FDA-retningslinjene for bioanalytisk validering. På grunn av effektiv opprensning ble det ikke observert matrikseffekter under LC-MS/MS-analyse. Fosfolipider ble ikke ekstrahert over i akseptoren under EME. Dette er en stor fordel, fordi fosfolipider er kjent for å forårsake ioneundertrykkelse i LC-MS/MS24. Tabell 3 sammenligner EME-metoden med laboratoriets referansemetode basert på proteinutfelling og fosfolipidfjerning. Forbruket av organisk løsemiddel var mye mindre med EME, og det var ikke behov for nitrogengass til avdampningsformål. Forbruksvarer og tidsbruk var mindre med EME, og prosedyren var forenklet sammenlignet med referansemetoden. Konklusjoner Med elektromembranekstraksjon (EME) kan mikroekstraksjon og grønn prøveopparbeidelse fullføres på 15 til 30 minutter med minimalt bruk av organiske løsemidler, kjemikalier og forbruksvarer. Akseptoren er vannbasert og kan injiseres direkte i LC-MS/MS etter ekstraksjon. Dermed elimineres behovet for løsemiddelfordampning og gjenoppløsning av ekstrakt. På grunn av effektiv opprensning observeres ingen matrikseffekter under LC-MS/MS-analyse. For plasma- og serumprøver er akseptorløsningen fri for proteiner og fosfolipider etter EME. Dette er en stor fordel, fordi proteiner kan tette LC-kolonner, og fosfolipider er kjent for å forårsake ioneundertrykking i LC-MS/MS. For første gang er kommersielt utstyr nå tilgjengelig for EME. Mens nåværende forskning og utvikling av teknikken frem til nå har blitt utført med laboratoriebygget utstyr, kan EME fremover utføres med utstyr av industriell standard, og eksperimentelle data kan enkelt reproduseres. EME kombinerer prinsippene for væske-væske ekstraksjon og elektroforese, og metodene og metodeutviklingen i EME er svært forskjellige fra tradisjonelle prøveopparbeidelsesteknikker. Derfor er det utviklet et sett med generiske metoder, foreløpig for basiske stoffer med log P>-2 og for sure stoffer med log P>0.5. Arbeid pågår med tilsvarende metoder for svært polare stoffer, for å fullføre utvalget av metoder som er klare til bruk. EME er en norsk oppfinnelse, som har blitt utviklet av mange forskere internasjonalt over 20 år, og er beskrevet i mer enn 500 vitenskapelige artikler. Forhåpentligvis vil laboratorier implementere EME og dra nytte av denne teknologien. For rutine- og oppdragslaboratorier kan motivasjonen for dette være å gjøre prøveopparbeidelsen grønnere, eller å forenkle eksperimentelle prosedyrer. For akademiske institusjoner kan motivasjonen være å utføre grunnleggende forskning på EME og å videreutvikle prinsippet. Implementering i mikrochip systemer, ekstraksjon av store biomolekyler, eller å leke med selektiviteten er bare noen få eksempler i denne retningen. Vi forventer mye mer innovasjon innenfor rammene av EME i årene som kommer. ● Tabell 3 Forbruk og prosedyre for EME metode og referansemetode for ekstraksjon av antidepressive legemidler i serum21
RkJQdWJsaXNoZXIy MTQ3Mzgy